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人轉鐵蛋白(TRF)ELISA試劑盒技術指導
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人轉鐵蛋白(TRF)ELISA試劑盒技術指導

河南快3预测号码推荐 www.taqvt.com 發布時間:2018/5/16   更新時間:2019/7/8

型 號:

價 格:電議

采購度:279

原產地:美洲

簡單介紹:人轉鐵蛋白(TRF)ELISA試劑盒技術指導用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中轉鐵蛋白(TRF)含量。

詳細信息
人轉鐵蛋白(TRF)elisa試劑盒技術指導僅供研究使用。

檢測范圍:                                                     

1.5μg/mL -60μg/mL

使用目的:

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中轉鐵蛋白(TRF含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本轉鐵蛋白(TRF水平。用純化的轉鐵蛋白(TRF抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入轉鐵蛋白(TRF),再與HRP標記的轉鐵蛋白(TRF抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉鐵蛋白(TRF呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品轉鐵蛋白(TRF濃度。

試劑盒組成

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(100μg/mL

0.5ml×1

3

標包被

12孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2張  

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要求 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

50μg/mL

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

25μg/mL

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

12.5μg/mL

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

6.25μg/mL

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

3.125μg/mL

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液


2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品*終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作程序總結:

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間*控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,*做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請*后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1試劑盒保存:;2-8。

2.有效期:6個月

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2.有效期:6個月

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